Пептиды для научных исследований почти всегда поставляются в лиофилизированном виде: в виде стабильного сухого порошка, полученного методом сублимационной сушки. Прежде чем их можно будет использовать в лабораторном протоколе, их необходимо восстановить — растворить порошок в подходящем растворителе до заданной концентрации. При тщательном выполнении восстановление представляет собой простую процедуру; при небрежном выполнении возникают ошибки, которых можно было бы избежать. В данном руководстве описаны рабочий процесс и расчёты.
Выбор растворителя
Наиболее часто в научных исследованиях для восстановления растворов используют стерильную воду или бактериостатическую воду. Для некоторых пептидов с низкой растворимостью в воде сначала требуется добавить небольшое количество сорастворителя. Выбор подходящего растворителя зависит от конкретного соединения: не следует полагаться на догадки, а необходимо проверить данные о растворимости в техническом описании продукта. Растворы всегда следует готовить в чистой среде, чтобы избежать попадания загрязнений.
Расчет объема
Основная взаимосвязь проста:
Концентрация = количество пептида ÷ объем растворителя
Переставили члены уравнения, чтобы найти объем, который нужно прибавить:
Объем = Количество пептида ÷ Желаемая концентрация
Например, при разведении флакона объемом 10 мг 2 мл растворителя получается концентрация 5 мг/мл. Если же вы хотите получить концентрацию 2 мг/мл из того же флакона по 10 мг, вам нужно добавить 5 мл растворителя. Многие поставщики, в том числе и в данном каталоге, предоставляют онлайн-калькулятор для расчета объема растворителя, в который можно ввести количество препарата во флаконе, объем растворителя и желаемую концентрацию, после чего сразу увидеть результат.
Пошагово
- 1 · Перед вскрытием флакона с герметичной крышкой дайте ему нагреться до комнатной температуры, чтобы уменьшить образование конденсата.
- 2 · Рассчитайте объем растворителя для заданной концентрации.
- 3 · Добавляйте растворитель медленно, направляя его по внутренней стенке пробирки, а не непосредственно на порошок.
- 4 · Не встряхивать. Аккуратно покрутите флакон или дайте ему постоять до полного растворения; пептиды могут быть чувствительны к интенсивному встряхиванию и образованию пены.
- 5 · Проверьте раствор — он должен быть прозрачным и не содержать видимых частиц.
- 6 · Нанесите на флакон этикетку с указанием концентрации и даты.
После восстановления
Раствор, приготовленный из сухого порошка, менее устойчив, чем сам порошок. Храните его в холодильнике и используйте в течение срока годности, указанного для данного соединения. Следует избегать многократных циклов замораживания-размораживания, которые приводят к деградации многих пептидов; если раствор необходимо хранить в течение длительного времени, разделите его перед замораживанием на одноразовые аликвоты — это позволит ограничить количество размораживаний, которым подвергается каждая отдельная порция.
Распространенные ошибки, которых можно избежать
- Непосредственное и интенсивное добавление растворителя к порошку, что приводит к образованию пены.
- Взбалтывать, а не перемешивать.
- Неучёт чистого содержания пептида в случаях, когда важна точность.
- Хранение растворов при комнатной температуре дольше, чем это необходимо.
Благодаря четкой методике и одному быстрому вычислению восстановление раствора становится надежным и воспроизводимым этапом лабораторной работы.
В данном руководстве описывается порядок работы с эталонными соединениями исследовательского качества исключительно в лабораторных условиях. Данные материалы не предназначены для употребления людьми или животными.
